前言：GUS染色液，GUS
GUS染色液（即用型）货号：RS4200有效期：6个月产品内容：名称20ml50ml100ml500mlStorage 试剂(A): X-Gluc染色液试剂(A1): X-Gluc 1支1支 2支 5支-20℃ 避光 试剂(A2): X-Gluc Solution400ul1mL 1mL*2 10mlRT试剂(B): GUS Buffer20ml50ml100ml500ml4℃ 避光产品说明：GUS（β-Galactosidase）基因是存在于E.coli等一些细菌基因组内的编码β-葡萄糖苷酸酶的一种水解酶，该基因常作为融合标记用于植物转基因分析和调控研究中。GUS受体基因系统有表达E.coli GUS酶的稳定性和在植物内的低活性，绝大多数植物没有检测到葡萄糖苷酸酶的背景活性，以β-葡萄糖苷酸酯类物质为底物，其反应产物可用多种方法检测出来。5-Bromo-chloro-3-indolyl β-D-glucuronide，cyclohexylammonium salt(简称为X-Gluc或X-GlcA)分子量为521.8，CAS号为18656-96-7，是检测大肠杆菌中GUS基因的底物，可快速检测植物中GUS基因融合标记。GUS染色液(即用型)又称β-葡萄糖苷酶基因染色试剂盒(β-Galactosidase Reporter Gene Staining Kit)简称为GUS染色液，其染色原理是适宜的反应条件下β-葡萄糖苷酶(GUS)可将X-Gluc水解成蓝色物质，该物质不溶解于转基因的细胞核组织中的靛蓝物质，具有GUS活性的部位或位点呈现蓝色或蓝色斑点，可用肉眼或显微镜观察到，GUS染色液可用于生物化学活性分析、免疫分析以及组织和细胞的组织化学染色，多用于转基因植物的GUS基因表达分析，该即用型试剂比常规GUS染色液操作简便。该试剂仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。自备材料： 1、 70%乙醇2、 去离子水3、 小瓶或多孔板、显微镜操作步骤(仅供参考)： 1、 配制X-Gluc溶液(50x)：20ml体积：取400ul X-Gluc Solution完全融化后加至1支X-Gluc中，充分溶解，即获得X-Gluc溶液(50x)。配制好的X-Gluc溶液(50x) -20℃保存，1个月有效。50ml/100ml体积：取1ml X-Gluc Solution完全融化后加至1支X-Gluc中，充分溶解，即获得X-Gluc溶液(50x)。配制好的X-Gluc溶液(50x) -20℃保存，1个月有效。500ml体积：取2ml X-Gluc Solution完全融化后加至1支X-Gluc中，充分溶解，即获得X-Gluc溶液(50x)。配制好的X-Gluc溶液(50x) -20℃保存，1个月有效。2、 配制X- Gluc 染色液：取适量X-Gluc Solution(50×)和GUS Buffer，按1:49比例充分混匀，配制成X- Gluc 染色液，如取200ul X-Gluc Solution(50×)加入到9.8ml GUS Buffer中，即配成10ml GUS染色液，该染色液**现配现用，短期可4℃保存3d。3、 取适量待染液片等组织加入适量GUS染色液，使GUS染色液完全浸没组织。4、 37℃孵育1-24h。随着孵育时间的延长，蓝色渐渐出现，当表达量较高时，GUS活性的部位或位点呈现蓝色或蓝色斑点。 5、 用70%乙醇脱去样本的叶绿素，一般样本浸没于乙醇1-3h，至阴性对照呈白色。如有必要可重复该脱色步骤，以便彻底清除叶绿素。样本保存于乙醇中，可用肉眼或普通光学显微镜下观察，白色背景上的蓝色即为GUS表达位点。注意事项： 1、 GUS染色液一般冰上配制，可以4℃避光保存3天。 2、 X-Gluc Solution(50×)应避免反复冻融，否则染色效率会下降。 3、 由于组织特异性等原因，蓝色颜色反应可能不完全一致，应注意摸索具体实验条件。4、 拟南芥的根、花和叶片以及烟草幼苗的根就可以不作任何预处理而直接染色。但是像烟草和马铃薯这些植物的茎和叶就必须在染色前切成薄片（1-3mm）。5、 当操作大的组织和样品时，可以选用真空渗入法来帮助底物渗入细胞，建议使用GUS染色液（RS2400）。6、 GUS染色液(即用型)染色灵敏度较好，但有时会出现非特异性反应(即假阳性)，如非特异性反应较明显，建议采购常规GUS染色液（RS2400）。为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。